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020-29820-234
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目 錄 （一）臨床試驗方案及方案中應關(guān)注的問(wèn)題 6
注冊申報指導原則（征求意見(jiàn)稿2） 一、前言 人類(lèi)免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）檢測試劑是指利用免疫學(xué)及分子生物學(xué)等方法原理對人血清、血漿或其它體液中的特定的HIV生物學(xué)標記物，包括HIV-1 p24抗原、HIV抗體（anti-HIV）、HIV核酸、HIV基因耐藥突變等進(jìn)行定量或定性分析的試劑。據《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡(jiǎn)稱(chēng)《辦法》）的分類(lèi)原則，該類(lèi)產(chǎn)品作為第三類(lèi)體外診斷（in vitro diagnostic；IVD）試劑管理，屬高風(fēng)險管理產(chǎn)品。本指導原則制定的主要目的是讓申請人明確在注冊申報過(guò)程中對本類(lèi)試劑在臨床研究方面重點(diǎn)關(guān)注內容，同時(shí)規范注冊申請人對于注冊申報資料中有關(guān)臨床研究資料的要求。 本指導原則是對HIV檢測試劑有關(guān)臨床研究的一般性要求，申請人應依據具體產(chǎn)品的特性對臨床研究資料的內容進(jìn)行充實(shí)和細化。申請人還應依據具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內容是否適用，若不適用，需具體闡述其理由及相應的科學(xué)依據。 本指導原則只是針對HIV檢測試劑的特點(diǎn)，強調需重點(diǎn)考慮的問(wèn)題，臨床試驗的基本要求應符合《體外診斷試劑臨床試驗指導原則》的規定，包括臨床試驗協(xié)議、方案、報告的撰寫(xiě)等。 本指導原則不包括行政審批要求，不作為法規強制執行。本指導原則是申請人和審查人員的指導文件，如果有能夠滿(mǎn)足適合的法規要求的其它方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關(guān)法規的前提下使用本指導原則。 本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定，隨著(zhù)法規和標準的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導原則相關(guān)內容也將進(jìn)行適時(shí)的調整。 HIV生物學(xué)標記物是指機體在感染HIV后，在不同的感染階段出現的生物學(xué)標記物，包括：HIV抗體、HIV-1 p24抗原、HIV核酸、HIV基因耐藥突變等。 就方法學(xué)而言，本指南主要適用于利用免疫印跡法、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨免疫熒光法和微粒子酶聯(lián)免疫法、膠體金法等免疫學(xué)方法對HIV抗原和/或抗體進(jìn)行定量或定性檢測的體外診斷試劑，以及應用核酸檢測的方法（如RT-PCR、TMA、NASBA、bDNA、實(shí)時(shí)熒光PCR等）對HIV 核酸（RNA/DNA）以及基因耐藥突變等進(jìn)行檢測和分析的體外診斷試劑，適用于首次注冊產(chǎn)品及申請許可事項變更的產(chǎn)品。 本指導原則不適用于國家法定血源篩查用HIV檢測試劑。 （一）臨床試驗方案及方案中應關(guān)注的問(wèn)題 臨床試驗實(shí)施前，研究人員應從流行病學(xué)、統計學(xué)、臨床醫學(xué)、檢驗醫學(xué)等多方面考慮，設計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機構的方案設置應基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗過(guò)程中遵循預定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗過(guò)程應在臨床研究機構的實(shí)驗室內并由本實(shí)驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導外，不得隨意干涉實(shí)驗進(jìn)程，尤其是數據收集過(guò)程。各臨床研究單位選用的參比試劑（包括與試劑配套的相應儀器）應完全一致，以便進(jìn)行合理的統計學(xué)分析。 試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說(shuō)明原因。臨床試驗中所涉及的樣本類(lèi)型應與產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)一致，且每種樣本類(lèi)型例數的選擇應符合基本的統計學(xué)要求。 1. 臨床研究單位的選擇 建議在選擇臨床單位時(shí)，綜合不同地區人種、流行病學(xué)背景、HIV的特性等因素選擇研究單位；臨床研究單位的實(shí)驗操作人員應熟悉檢測系統的各環(huán)節（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉臨床研究方案。 在整個(gè)實(shí)驗中，擬申報產(chǎn)品（以下稱(chēng)考核試劑）、對比試劑、確認試驗方法都應處于有效的質(zhì)量控制下，同時(shí)按照試劑說(shuō)明書(shū)的要求，定期對試驗所涉及的儀器進(jìn)行校準，以最大限度保證試驗數據的準確性及可重復性。 建議在不同的臨床單位使用同一批考核試劑進(jìn)行臨床試驗，以便對數據進(jìn)行科學(xué)客觀(guān)的統計分析。 2. 新HIV檢測試劑的臨床研究 新HIV檢測試劑主要包括兩類(lèi)：定量檢測試劑和定性檢測試劑。 對于這些無(wú)對比試劑可選擇的新HIV檢測試劑而言，其臨床研究應選擇經(jīng)金標準方法確診的HIV感染人群和部分未感染HIV的正常人群，及與已有的相關(guān)標記物及臨床進(jìn)展及轉歸進(jìn)行比較研究，驗證考核試劑的敏感性和特異性。 對于定量檢測試劑同時(shí)還應對其量值與臨床進(jìn)展狀況、轉歸、治療情況等的相關(guān)性進(jìn)行分析。 3. 已有同類(lèi)產(chǎn)品上市的臨床研究 選擇境內已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類(lèi)產(chǎn)品作為對比試劑，使考核試劑與之進(jìn)行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。在臨床研究中，與已有同類(lèi)產(chǎn)品進(jìn)行比對時(shí)，往往會(huì )出現不一致的檢測結果。對于這些檢測結果不一致的樣品，應采用金標準或其它方法再次進(jìn)行確認或提供臨床診斷資料以進(jìn)一步明確樣品（采集樣品時(shí)受試者）所處的感染狀態(tài)，從而對考核試劑的性能進(jìn)行客觀(guān)科學(xué)的評價(jià)。 確認試驗應選用境內已批準上市且臨床普遍認為質(zhì)量較好的確認試劑。 對于定量檢測試劑，同時(shí)還應該分析檢測量值的線(xiàn)性相關(guān)性、定量檢測結果與對比試劑檢測結果的一致性等。 4. 臨床研究對象選擇 （1） 總體要求 根據《體外診斷試劑臨床試驗指導原則》的要求，HIV檢測試劑，一般包括抗原和/或抗體（檢測）類(lèi)試劑、核酸擴增（檢測）類(lèi)試劑，二者對于臨床研究的病例數并不相同。對于臨床試驗而言，抗原和/或抗體（檢測）類(lèi)試劑需要至少1000例，核酸擴增（檢測）類(lèi)試劑至少500例。 （2） 基因型方面的考慮 HIV病毒為逆轉錄病毒，其基因具有顯著(zhù)的多樣性，不同的地區和民族，HIV流行的基因型不同。境內流行的HIV主要為M組HIV-1型（目前境內尚未見(jiàn)HIV-1 N組和O組的報道，HIV-2型感染病例的報道極少），其基因型主要為B/B’、BC重組型（包括CRF 07_BC重組型和CRF 08_BC重組型）以及AE重組型（CRF 01_AE重組型）。而且，HIV-1基因型具有一定的地域差異，不同的地區流行的HIV基因型也不盡相同，如CRF 07_BC重組型流行于四川、新疆等地，而CRF 08_BC重組型則流行于廣西等地，因此，在選擇HIV感染者病例時(shí)，首先應根據HIV流行的情況，選擇能代表我國流行基因型的、不同地區的HIV-1感染者病例，以對試劑檢測我國流行的HIV-1感染的能力進(jìn)行客觀(guān)科學(xué)的評價(jià)，選擇的基因型應至少包括三種不同的基因型。 a.對于HIV-1感染者的病例數，HIV-1感染者病例數應具有統計學(xué)意義。 表1. 不同HIV檢測試劑對于臨床樣本選擇的一些基本考慮
注：陽(yáng)轉血清盤(pán)檢測結果的評價(jià)，應根據國內、國際的相關(guān)規定進(jìn)行評價(jià)。 b.對于HIV-1 O組、HIV-2型感染病例，也應進(jìn)行適當驗證，樣本應經(jīng)過(guò)科學(xué)的驗證和確認，樣本可來(lái)源于HIV感染者，也可采用經(jīng)過(guò)全面驗證的血清盤(pán)。 （3） 不同感染階段的考慮 HIV感染機體后，在不同的時(shí)期機體的免疫反應不同，其代表的生物學(xué)標記物也不同，標記物的濃度也不同，樣本選擇時(shí)，對于樣本滴度應含有一定數量的低滴度/弱陽(yáng)性樣本。 （4） 臨床樣品量的考慮 臨床研究應選擇部分正常健康人群樣本和干擾樣本（交叉反應樣本），比較正常組、干擾組和感染組結果，以便對申報產(chǎn)品的臨床性能做出全面科學(xué)的分析。建議對抗原和抗體類(lèi)試劑，其健康人群例數的選擇以不超過(guò)500例為宜，陽(yáng)性樣本數應符合表1要求，其余為干擾樣本。對核酸檢測類(lèi)試劑（定性），其健康人群例數的選擇以不超過(guò)150例為宜，陽(yáng)性樣本數應符合表1要求，其余為干擾樣本。對核酸檢測類(lèi)試劑（定量），其健康人群例數的選擇以不超過(guò)30例為宜，陽(yáng)性樣本數應符合表1要求，其余為干擾樣本。對于新型試劑或臨床意義有待進(jìn)一步明確的試劑，可適當增加正常樣本數�？傮w而言，本類(lèi)試劑臨床試驗的樣本例數，無(wú)論是正常組、干擾組和HIV感染組，每一組受試者的最小入選人數須滿(mǎn)足統計學(xué)分析的基本要求。 檢測的樣本量在每一個(gè)臨床研究單位應盡可能均勻分布，包括正常組、干擾組和HIV感染組。 （5） 干擾（交叉反應）樣本的考慮 考慮到我國HIV感染的特殊情況以及HIV的傳播特點(diǎn)，建議在臨床研究中選擇臨床病例時(shí)，應選擇部分HIV相關(guān)病毒（如HBV、HCV）感染的病例，以評價(jià)考核試劑的特異性。 干擾（交叉反應）樣本列表：
以上特異性樣本可根據產(chǎn)品特性進(jìn)行適當選擇。 5. 體液樣本的考慮 對于唾液、尿液等體液樣本，無(wú)論考核試劑采用何種檢驗方法，均應采用來(lái)自同一患者的血液樣本進(jìn)行同源對比試驗，應含有一定數量的低滴度/弱陽(yáng)性樣本（不少于20例）。 檢測血液樣本用對比試劑的檢測性能應盡量高于考核試劑，對于檢測不符的樣本應采用金標準方法對血液樣本進(jìn)行確認。 6.凍存與新鮮樣本的考慮 陽(yáng)性?xún)龃鏄颖纠龜祽∮陉?yáng)性樣本總例數的90％，陽(yáng)性新鮮樣本例數應大于陽(yáng)性樣本總例數的10％。 7.確認試劑的考慮 抗體檢測： a.樣本的選擇：見(jiàn)表1初篩呈弱陽(yáng)性。 b.對比試劑的選擇：應選擇確認試劑進(jìn)行比對試驗。 c.不一致和不確定樣本的確認：應進(jìn)行患者隨訪(fǎng)檢測（4周后）或采用其他方法進(jìn)行驗證。 8. 統計學(xué)分析 對臨床試驗結果的統計應選擇合適的統計方法。 對定性試劑，應分析考核試劑的陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區間、考核試劑和對比試劑的一致性（如kappa值）。如利用陽(yáng)轉血清盤(pán)對試劑檢測早期感染的能力進(jìn)行評價(jià)，應參考WHO對HIV抗體試劑的評價(jià)報告，分析考核試劑的陽(yáng)轉血清相對敏感性系數。 對定量試劑，應分析考核試劑陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區間、考核試劑和對比試劑的一致性（如kappa值）等之外，還應該分析考核試劑與對比試劑的相關(guān)性、線(xiàn)性回歸、定量準確性及一致性（如Bland-Altman 模型），同時(shí)按基因型（核酸檢測試劑）對樣本進(jìn)行分組分析考核試劑與對比試劑的相關(guān)性、線(xiàn)性回歸、定量準確性及一致性（如Bland-Altman 模型）等。 對于對比實(shí)驗的等效性研究，最常用是對考核試劑和對比試劑兩組檢測結果的相關(guān)及線(xiàn)性回歸分析，應重點(diǎn)觀(guān)察相關(guān)系數（r值）、回歸方程斜率及y軸截距等指標。 對于統計方法的選擇可以選擇多種方法，而不用過(guò)于強調一種方法。在臨床研究方案中應明確統計檢驗假設，即評價(jià)考核試劑與對比試劑是否等效的標準。 9. 結果差異樣本的驗證 在數據收集過(guò)程中，對于兩種試劑的檢測結果有明顯差異的樣本，應采用金標準或其它方法再次進(jìn)行確認（如HIV-1 p24抗原、HIV-1 RNA檢測試劑、Western Blot試劑等），對患者所處的HIV-1感染狀態(tài)進(jìn)行鑒別，同時(shí)結合患者的臨床表征對差異原因及可能結果進(jìn)行分析，必要時(shí)應按照《全國艾滋病檢測技術(shù)規范》的要求進(jìn)行隨訪(fǎng)。 （二）臨床試驗（總結）報告撰寫(xiě) 根據《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應該對整個(gè)臨床試驗實(shí)施過(guò)程、結果分析、結論等進(jìn)行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數據和統計分析方法。建議在臨床試驗總結報告中對以下內容進(jìn)行詳述。 1.臨床試驗總體設計及方案描述 （1）臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位的選擇、對比試劑及所用儀器基本情況介紹 （2）病例納入/排除標準、不同病種的預期選擇例數 （3）樣本類(lèi)型，樣本的收集、處理及保存等 （4）統計學(xué)方法、統計軟件、評價(jià)統計結果的標準 2.具體的臨床試驗情況 （1）對各研究單位的病例數、病種分布情況進(jìn)行總合，以列表或圖示方式給出具體例數及百分比。 （2）質(zhì)量控制：如試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況等。 （3）具體試驗過(guò)程，樣本檢測、數據收集、樣本長(cháng)期保存、結果不一致樣本的驗證鑒別等 3.統計學(xué)分析 （1）數據預處理、差異數據的重新檢測或驗證鑒別以及是否納入最終數據統計、對異常值或缺失值的處理、研究過(guò)程中是否涉及對方案的修改等。 （2）一致性分析和相關(guān)性 相關(guān)性主要包括陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區間。一般可采用四格表卡方檢驗或kappa檢驗分析兩種試劑定性檢測結果的一致性。 對于定量試劑，還應運行特定的數據分析模型（如Bland-Altman 模型）對兩種試劑定量分析結果的一致性進(jìn)行分析。同時(shí)，還應采用回歸分析的方法分析兩種試劑檢測結果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是實(shí)驗試劑結果，x是參比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數，并給出a和b的95%（或99%）置信區間。由于不同HIV-1基因型或者不同濃度區間，試劑的性能可能存在一定差異，因此，建議對總體樣品，按照濃度范圍和/或基因型進(jìn)行區間分層統計，對不同區間內的結果進(jìn)行相關(guān)性和一致性分析，以更好的驗證兩種試劑的相關(guān)性。 4.討論和結論 對總體結果進(jìn)行總結性描述并簡(jiǎn)要分析試驗結果，對本次臨床研究有無(wú)特別說(shuō)明，最后給出臨床試驗結論。 1. 《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》，（國食藥監械[2007]229號），2007年4月19日。 2. 《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導原則》，（國食藥監械[2007]240號），2007年4月28日。 3. 《全國艾滋病檢測技術(shù)規范》 |
